Des chercheurs espagnols étudient des méthodes permettant d'améliorer la détection des norovirus humains et du virus de l'hépatite A dans les légumes verts et les fruits rouges. Dirigée par Susana Guix, Ph.D., de l'université de Barcelone, l'étude vise à affiner les processus d'extraction, de concentration et de détection des virus afin de surmonter les difficultés liées aux faibles concentrations de virus et aux faux positifs.
"Il est très difficile de cultiver des virus en laboratoire comme on le fait pour les bactéries. Nous devons donc nous appuyer sur des méthodes moléculaires pour effectuer les tests. Si des virus sont présents dans les produits, ils sont généralement en très petit nombre et en très faible concentration, et nous devons donc avoir de très bonnes procédures d'extraction.
"Un autre défi est que si nous obtenons des résultats positifs, cela n'indique pas nécessairement qu'il y a un risque réel - le virus peut être inactivé.
Le projet est soutenu par le Center for Produce Safety (CPS) et implique une collaboration avec Gloria Sánchez Moragas, Ph.D., à l'IATA-CSIC de Valence, en Espagne. Alors que Mme Sánchez est spécialisée dans les méthodes moléculaires de détection des virus entériques et de contrôle de l'inactivation, M. Guix se concentre sur les procédures de culture cellulaire. "Je pense que les deux laboratoires sont complémentaires", a indiqué M. Guix.
Les premières étapes ont consisté à mettre au point deux protocoles d'extraction et de concentration du virus, l'un commercial et l'autre non commercial. Les deux ont été testés par rapport aux protocoles de la Food and Drug Administration (FDA) et aux normes industrielles ISO. Les virus ont été extraits de légumes à feuilles et de baies achetés dans des épiceries et enrichis de quantités connues de norovirus ou de virus de l'hépatite A. Les résultats ont montré que la méthode commerciale permettait de récupérer plus de virus que la méthode commerciale.
Les résultats ont montré que la méthode commerciale permettait de récupérer plus de virus dans les légumes verts, les framboises et les myrtilles que les autres méthodes. Pour les fraises, la méthode commerciale a donné des résultats similaires à ceux du protocole de la FDA. "Jusqu'à présent, cette méthode nous a donné de meilleurs résultats pour le virus de l'hépatite A et les norovirus sur six types d'aliments différents, et les résultats sont cohérents", a déclaré M. Guix.
Une fois les échantillons de virus préparés, les tests reposent souvent sur la RTqPCR, un test moléculaire qui détecte et quantifie l'ARN viral. Toutefois, la présence d'ARN ne confirme pas que le virus est viable et infectieux. Les chercheurs ont résolu ce problème en combinant leur nouvelle méthode d'extraction avec une RTqPCR modifiée, ce qui a permis de réduire les détections de virus non viables par rapport aux protocoles de la FDA et de l'ISO.
Dans la deuxième phase du projet, les chercheurs mesureront la disparition du virus sur des baies et des légumes verts à feuilles stockés dans des conditions post-récolte simulées. En outre, ils évalueront l'efficacité de trois désinfectants couramment utilisés pour les légumes à feuilles : le chlore, le dioxyde de chlore et l'acide peracétique.
Les résultats devraient permettre à l'industrie des fruits et légumes de mieux évaluer les risques liés aux virus, d'améliorer la précision de la détection et de comprendre la persistance des virus pendant le stockage et le traitement après la récolte.
Source : www.centerforproducesafety.org/